最近,站上关于ELISA试剂盒的讨论帖子非常多,今天也发表一下自己的一些看法,对ELISA的见解有不对的地方,希望指正或者直接拍砖。如何灵活应用ELISA这个检测方法以及如何去挑选ELISA试剂盒。ELISA这个方法的原理,大家都很清楚,网上的资料一大堆。可真正用起来的时候,有时候就有点犯糊涂,我谈一下自己的理解。
ELISA试剂盒检测方法简述:
1)间接法测抗体:将特异性抗原包被在固相载体上,形成固相抗原,加入待检标本(含相应抗体),其中抗体与固相抗原形成抗原-抗体复合物,再加入酶标记的抗抗体(抗人免疫球蛋白抗体,亦称二抗),与上述抗原-抗体复合物结合。此时加入底物,复合物上的酶则催化底物而显色。
双抗体夹心法测抗原:将已知的特异性抗体包被在固相载体上,形成固相抗体,加入待检标本(含相应抗原),抗原与固相抗体结合成复合物,再加入特异性酶标抗体,使之与已形成的抗原-抗体复合物结合,当加入与酶相应的底物时,酶催化底而显色,根据颜色的有无和颜色的深浅对待测抗原进行定性和定量。
ELISA试剂盒竞争法测抗原:将特异性抗体与固相联结,形成固相抗体,加入待测标本(含相应抗原)和相应的一定量的酶标抗原,待测标本中的抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,待测标本中抗原含量越高,则与固相抗体结合亦越多,使得酶标抗原与固相抗体结合的机会就越少,甚至没有机会结合。加入底物后不显色或显色很浅,显色深者为阴性。
酶联免疫试验的量反应分析:不同的酶联免疫方法检测结果的OD值均与标本中待检的抗原或抗体的量相关(间接法和夹心法正相关,竞争法负相关),因此可以利用OD值对标本中的待检物质进行定量分析。
酶联免疫试验质反应分析:ELISA试剂盒根据检测标本OD值,对标本中待测物质做出有或无的判定.
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