单核细胞树突状细胞培养:
1 、准备新鲜的外周血单个核细胞( PBMC )。
2 、将外周血单个核细胞在铺在培养瓶中,用加入 25 mL 免疫细胞无血清培养基货号 BW12002 。
3 、在 37 ℃, 5 % CO 2 的潮湿培养箱中孵育 2 ~ 3 小时。
4 、弃掉含非贴壁细胞的培养基。
5 、用生理盐水洗涤贴壁细胞(主要是 CD14 + 单核细胞)三次。
6 、往免疫细胞无血清培养基添加 50 至 100 ng /
mL 的重组人 IL-4 和 50 ng / mL 的重组人 GM-CSF 。细胞密度应介于 1~3x10 5 细胞 / mL 之间。研究者可视情况加入灭活的人自体血浆。
7 、在 37 ℃, 5 % CO 2 的潮湿培养箱中连续孵育 5 天。培养 3 天左右换液。同时添加 IL-4 和 GM-CSF 。
8 、 6 天之后,细胞表现出典型的树突状细胞的形态和表面标记(细胞 CD1a , CD80 , CD86 , HLA-DR )。
9 、向培养基中添加 1 μ g/ mL 的 LPS 或者 50 μ l/mL 的 TNF- α诱导的树突状细胞的成熟。
注:对于贴壁单核细胞也可以被磁珠分离。
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