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单核细胞树突状细胞培养
文章来源:银河集团186net   添加时间:2015/6/13 11:18:50 点击率:2784

单核细胞树突状细胞培养:

1 、准备新鲜的外周血单个核细胞( PBMC )。

2 、将外周血单个核细胞在铺在培养瓶中,用加入 25 mL 免疫细胞无血清培养基货号 BW12002

3 、在 37 ℃, 5 CO 2 的潮湿培养箱中孵育 2 3 小时。

4 、弃掉含非贴壁细胞的培养基。

5 、用生理盐水洗涤贴壁细胞(主要是 CD14 + 单核细胞)三次。

6 、往免疫细胞无血清培养基添加 50 100 ng / mL 的重组人 IL-4 50 ng / mL 的重组人 GM-CSF 。细胞密度应介于 1~3x10 5 细胞 / mL 之间。研究者可视情况加入灭活的人自体血浆。

7 、在 37 ℃, 5 CO 2 的潮湿培养箱中连续孵育 5 天。培养 3 天左右换液。同时添加 IL-4 GM-CSF

8 6 天之后,细胞表现出典型的树突状细胞的形态和表面标记(细胞 CD1a CD80 CD86 HLA-DR )。

9 、向培养基中添加 1 μ g/ mL LPS 或者 50 μ l/mL TNF- α诱导的树突状细胞的成熟。

注:对于贴壁单核细胞也可以被磁珠分离。

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