elisa试剂盒是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。虽然elisa试剂盒的操作步骤看似简单，但没做到位的话就会影响实验的效果。所以elisa试剂盒实验时至关重要的步骤有：

第一、重要的洗涤：

不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的实验结果。如果未结合的材料残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。有必要的话，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。

第二、关键的封闭：

封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。如果背景过高，怀疑封闭不充分，那么可以尝试使用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。

目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。

第三、抗体浓度须优化：

如果试剂稍有不同，则可能需要优化抗体的量。非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点，切勿使用过多的一抗或二抗。

第四、检测试剂要适量：

切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高，或者未正确稀释，则会导致高背景。也不要显色过度，如有必要，优化一下何时应加入终止液。

只有确保每一步操作都做到位，才会呈现完美的实验结果。所以elisa实验的每一步都很重要，不可以掉以轻心。